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        1. lipo2000操作方法
          發布時間:2013-7-8
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          使用Lipofectamine 2000轉染Stealth RNA或者進入哺乳動物細胞時,遵從以下一般性指導:

          1 為了獲得最佳基因阻斷結果,每一種細胞系轉染StealthRNA或者siRNA的量都需要經過實驗確定。如果您是首次轉染您的細胞系,推薦嘗試使用幾個Lipofectamine2000的濃度,并在20-100nM范圍內改變StealthRNA或者siRNA的濃度,以確定達到最佳基因阻斷水平所需要的條件。高濃度的StealthRNA或者siRNA可能具有細胞系依賴性。注:我們推薦開始時使用40nM Stealth RNA或者。

          2 30-50%細胞匯合度時進行轉染。通常基因阻斷的分析至少要在轉染后24-72小時進行。低密度轉染細胞可以使轉染和分析之間更長的間隙更長,從而使由于細胞過度生長造成的細胞活性損害減少到最低。根據靶基因的特性,高密度轉染的細胞可能更加適合條件的優化。

          3 不要在轉染時的培養基中加入抗生素,因為這將會降低細胞轉染的效率和導致細胞死亡。

          4 為了獲得更好的結果,可以使用Opti-MEM® I 低血清培養基(目錄號31958-062)在形成復合物前稀釋Lipofectamine2000Stealth RNA或者寡聚物。

          5 可以使用invitrogen BLOCK-iT™熒光寡聚物(BLOCK-iT™ Fluorescent Oligo)(目錄號 2013)幫助優化細胞系的轉染條件。一旦確定了用來轉染的最佳條件,在每一次實驗都包括BLOCK-iT™熒光寡聚物,作為轉染效率的指示劑。如果需要的更多的信息,請參閱BLOCK-iT™熒光寡聚物說明書,說明書可以通過我們的網站下載或者通過撥打技術服務熱線。 

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